DNA提取是基因检测的第一步,也是决定检测成败的关键。本文介绍DNA提取的原理和方法。
DNA提取的目标是从生物样本中获得纯净、完整的DNA。基本步骤包括:裂解细胞释放DNA、去除蛋白质和RNA等杂质、纯化DNA。
常见的DNA提取方法:
酚-氯仿抽提法:传统方法,用有机溶剂使蛋白质变性沉淀,DNA留在水相。纯度高但步骤繁琐、使用有毒试剂。
离心柱法:DNA在高盐条件下结合到硅胶膜上,洗去杂质后用低盐缓冲液洗脱。方便快捷,是最常用的方法。
磁珠法:表面修饰的磁珠在特定条件下结合DNA,用磁铁分离磁珠,洗涤后洗脱。适合自动化,PG化验所即采用磁珠法自动提取。
母血游离DNA提取有特殊性:游离DNA片段短(约150bp)、含量低,需要专门的提取试剂盒。提取时要特别注意:使用血浆而非全血(避免大量母亲基因组DNA稀释);避免母体基因组DNA污染;高效回收短片段。
提取后的DNA需要质检:紫外分光光度计测浓度和纯度(A260/A280比值约1.8为纯DNA);荧光法更精确地测双链DNA浓度。质量达标后进入下游检测。
PG化验所使用自动化核酸提取工作站和经过验证的试剂盒,确保DNA提取效率和纯度。虽然客户看不到这一步,但高质量的DNA是准确检测的基础。实验室流程详见PG化验所官网www.pghuayansuo.com。
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